熒光分光光度計的原理和優(yōu)缺點

熒光分光光度計是用于掃描液相熒光標記物所發(fā)出的熒光光譜的一種儀器。其能提供包括激發(fā)光譜、發(fā)射光譜以及熒光強度、量子產(chǎn)率、熒光壽命、熒光偏振等許多物理參數(shù)，從各個角度反映了分子的成鍵和結構情況。

熒光分光光度計的基本原理：

由高壓汞燈或氙燈發(fā)出的紫外光和藍紫光經(jīng)濾光片照射到樣品池中，激發(fā)樣品中的熒光物質(zhì)發(fā)出熒光，熒光經(jīng)過濾過和反射后，被光電倍增管所接受，然后以圖或數(shù)字的形式顯示出來。 物質(zhì)熒光的產(chǎn)生是由在通常狀況下處于基態(tài)的物質(zhì)分子吸收激發(fā)光后變?yōu)榧ぐl(fā)態(tài), 這些處于激發(fā)態(tài)的分子是不穩(wěn)定的,在返回基態(tài)的過程中將一部分的能量又以光的形式放出，從而產(chǎn)生熒光。

不同物質(zhì)由于分子結構的不同,其激發(fā)態(tài)能級的分布具有各自不同的特征，這種特征反映在熒光上表現(xiàn)為各種物質(zhì)都有其特征熒光激發(fā)和發(fā)射光譜，因此可以用熒光激發(fā)和發(fā)射光譜的不同來定性地進行物質(zhì)的鑒定。

熒光分光光度計的優(yōu)缺點：

優(yōu)點：靈敏度高，可以用于掃描液相熒光標記物所發(fā)出的熒光光譜，不但可以做一般的定量分析, 而且還可以推斷分子在各種環(huán)境下的構象變化, 從而闡明分子結構與功能之間的關系。

缺點：

1、熒光的光強并不高，所以呈線性情況有時不很理想；

2、某些反應熒光持續(xù)的時間較短；

3、熒光的發(fā)散方向不集中，不像透射光那樣集中，強度高；

4、受某些離子的干擾影響，熒光會湮滅，試驗速度必須要快。