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氣相色譜儀外標法定量分析優缺點和適用情況說明

點擊: 次 時間:2016-08-29 10:00

氣相色譜儀外標法

一、外標法的概念

外標法又稱標準曲線法,依照測量標準品所繪制的曲線計量被測樣品含量的方法。

外標法是用待測組分的純品作對照物質。此法可分為工作曲線法及外標一點法等。工作曲線法是用對照物質配制一系列濃度的對照品溶液確定工作曲線,求出斜率與截距。準確進樣與對照品溶液相同體積的樣品溶液,根據待測組分的信號,從標準曲線上查出其濃度或用回歸方程計算,工作曲線法也可用外標二點法代替。

二、外標法的優缺點

優點:
  簡單、適合大量樣品分析;

缺點:

  每次色譜條件很難相同,容易出現誤差;

  我們作體外藥物分析時均采用外標法,體內藥物分析,因提取步驟煩瑣,都采用內標法進行校正,但如果儀器穩定、方法的重現性好,也可使用外標法,國外體內藥物分析用外標法的也有不少,但小析姐認為最好使用內標法。

實際樣品檢測用外標法的更多,原因如下:

1.內標物難獲得,特別是同位素標記的有相近行為的內標物;

2.操作步驟多、計算煩瑣;

如,在新藥報批中使用內標物,則需報送內標物的結構確證資料,在報生產的同時還要報送此內標物對照品。所以,現在連SDA的專家都不推薦使用內標法。

最初使用內標是因為進樣器進樣不準確,采用內標可以校正進樣誤差。現在的HPLC用定量環進樣準確度很高,加了內標有時候因為操作的誤差反而降低準確度。在藥物質量檢驗中,如果是原料藥,或者制劑的成份不多,用外標法即可,不一定非要用內標法,并且目前越來越多的標準均放棄使用內標法。

對于體內藥物分析,分析方法的誤差反而不重要,而在樣品處理過程中引入的誤差要引起足夠的重視,所以,一般在處理過程中加入內標以校正誤差。此時,回收率的高低要求并不高,雖然要求絕對回收率在70%或80%以上,但是,有時低一些也無所謂,關鍵是回收率的穩定性、測定的重現性。

三、定量分析中怎樣選擇內標法或外標法

內標與外標都是氣相色譜儀?定量的一種方法而已,至于方法的好壞不能一概而論,做不同的分析,面對不同的要求,再加上分析成本、分析效率等問題,簡單而有效進行定量分析滿足要求才最重要。

1、從前做過很多醫藥、農藥中間體的芳香族鹵代化合物的常量定量分析,沒有自動進樣器,用外標法定量,確實重現性與穩定性非常差,結果經常受到搞合成同事的質疑。

2、上面已經提到當做方法驗證的時候,當同一樣品配制6個樣品溶液用所選用的外標法進行定量的時候,RSD都滿足1.5%的要求時,也分為兩種情況,小于1%和大于1%,小于1.5%。

3、對于微量分析,比如農藥和獸藥殘留的分析、環境分析等,根據不同的限量標準要求對于精密度的要求也比常量分析的要求要寬松的多,RSD有時可以允許達到10%甚至更高,這時可能外標法有更大的應用空間。

4、單從精密度方面去考慮,排除其它成本和效率的因素,個人認為還是內標優于外標。

應用外標法能夠滿足要求,首選還是外標法了,畢竟簡單而省事。對于精密度要求比較高、結果準確度會產生重大影響、實驗室條件不是很理想的等等條件下,用內標法還是必要的。無論應用那種方法,方法的驗證和確認都是很重要的,只要是按照程序經過驗證和確認的方法,都有其應用的空間。

(文章參考實驗與分析網)?

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