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液相色譜儀流動相的配制與使用

點擊: 次 時間:2022-04-20 14:47

液相色譜儀是利用混合物在液-固或不互溶的兩種液體之間分配比的差異,對混合物進行先分離,而后分析鑒定的儀器。對高沸點、難氣化化合物的混合物通過色譜柱和淋洗劑實現分離。由于HPLC具有高分辨率、高靈敏度、速度快、分離效率高、色譜柱可反復利用,流出組分易收集等優點,因而被廣泛應用到生物化學、食品分析、醫藥研究、環境分析、無機分析、石油化工等各種領域。

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LC210液相色譜儀

1、恒度洗脫

  一定是將水相與有機相混合后、抽濾(使用混合型過濾膜),用一個管路(如A管)泵入儀器,這是使用的原則。切勿因節約有機相、便于摸索色譜條件等原因而使用兩個管路(一個純水相、一個純有機相)泵入儀器,即便配制了脫氣機,因為這樣極易造成水相中鹽和表面活性劑的少量析出。

  剩余流動相完全可繼續使用,密封后放置陰涼處,待下次試驗時與新配制的流動相混合后抽濾即可。無需擔心發霉、無機鹽析出、揮發、比例不準等問題。

2、梯度洗脫

  流動相配制最為科學的方式是:A相為高比例的水相-低比例的有機相、B相為低比例的水相-高比例的有機相。其次為:A相為高比例的水相-低比例的有機相、B相為純有機相。最不科學的為:A相為純水相、B相為純有機相,如既有質量標準采用了此種方式,建議改為第二種或第一種方式,否則基線漂移嚴重,難以進行穩定的雜質檢測。

梯度洗脫結束后,建議經5分鐘回到初始狀態,再平衡5分鐘后開始下一針測定。注意這10分鐘的穩定極為關鍵。切勿短時間內回到初始狀態,會對儀器和色譜柱損傷較大。

3、水相中的溶質溶解方式

  水相中需溶解的無機鹽和表面活性劑等固體溶質,建議采用加熱法,不建議采用振搖、超聲等方式。不當方式的溶解,溶質可能處于“臨界膠團濃度”,其后一旦遇到某特殊情形(如遇有機溶劑、溫度劇降等),極易析出少量結晶。而一旦析出,便將損傷儀器和色譜柱,呈現泵頭處析出“鹽和白粉”的現象。

4、注意事項

如需使用正相系統,一定要單獨采用一臺儀器(如二手的或較為破舊的),切勿采用異丙醇轉換,此舉對儀器損傷極大。

正相所使用的流動相(如正己烷、環己烷等),無需抽濾,混勻超聲后即可使用。




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