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超高效液相色譜技術參數相關解讀

點擊: 次 時間:2017-06-03 10:17

一、超高效液相色譜介紹
    超高效液相色譜(Ultra Performance Liquid Chromatography\ UPLC)是分離科學中的一個全新類別,UPLC借助于HPLC(高效液相色法)的理論及原理,涵蓋了小顆粒填料、非常低系統體積及快速檢測手段等全新技術,增加了分析的通量、靈敏度及色譜峰容量。超高效液相色譜是一個新興的領域,作為世界第一個商品化UPLC產品的Waters ACQUITY UPLCTM超高效液相色譜系統在1996年問世,之后像安捷倫、島津等公司也陸續開始生產超高效色譜儀。目前,超高效液相色譜儀已經開始逐漸地投入液相實驗中。
二、超高效液相色譜技術參數
列舉部分儀器的個別參數,供參考:
1、泵系統
最大操作壓力 15000psi(1mL/min)
流速范圍:0.001-2.000mL/min, 增量0.001mL;
流速精度:0.075% RSD;
流速準確度:±0.5%;
梯度準確度:± 0.3%;
梯度精度:0.15%RSD;
壓力范圍:0-15,000 psi;
真空脫氣機:在線真空脫氣,六通道均可在線脫氣,有自動柱塞清洗和進樣針清洗功能。
2、溫控自動進樣器
進樣精度:<0.3%RSD;
進樣準確度:±1 μl;
進樣線性度:> 0.999;
進樣體積:0.1 to 50 μL,增量0.1μL;
樣品污染度:<0.004%;
樣品溫度范圍:4°C -40°C,增量:1°C,帶制冷功能;
溫控穩定性:±0.5℃;
樣品盤數:96,384 兩種規格;
樣品瓶:2mL樣品瓶,0.65mL,1.5mL兩種規格的離心管。
3、柱溫箱
溫度范圍:室溫以上5°C -90°C;
控溫精度:±0.1°C;
溫度準確性±0.5℃。
二極管陣列檢測器:
二極管數:≥1024;
波長范圍:190-800 nm;
分辨率:≤1.2 nm;
波長準確度:≤±1nm;
波長精度:≤±0.1nm;
基線噪音:<±1.0×10-6AU;
基線漂移:<1×10-4AU/h;
最大采集頻率:≥100 Hz;
4、檢測器配置
紫外可見檢測器、光電二極管矩陣檢測器、蒸發光散射檢測器
三、超高效液相色譜解讀
    UHPLC的標志性特點就是壓強高,進樣量少,死體積小,流速慢,出峰快。耐壓是首要的,然后就是色譜柱了,其次就是儀器系統的整體設計。對UHPLC來說,重點還是流量的精準和耐壓,還有就是延遲體積小,響應時間要夠快。
    而對耐高壓系統的評價,一般12000psi可以耐受大部分的試驗條件,如果色譜條件更改導致壓力再提升,色譜柱的壽命可能會受影響,可能得不償失。對于絕大多數要進行成本核算的使用者來說。
    有多少個方法的流速是需要設置到小數點后第三位的?絕大多數方法的流速是1.0ml/min或者0.8ml/min之類的設置,小數點后兩位的精度足夠我們用了。目前大多數色譜軟件識別色譜峰的保留時間窗都是5%。延遲體積,對于新開發的方法或者方法傳遞的要求而言,是越小越好。目前各廠家好像都能控制在500ul以下,甚至于100ul以下。
    根據檢測的樣品來定小內徑小填料色譜柱的規格。
    高靈敏小檢測池的檢測器,與普通LC檢測器相比,檢測器的耐壓,更高,靈敏度要高幾倍。DAD檢測器也很有門道,要達到更高的靈敏度和信噪比,目前的潮流是全反射光纖流通池。貌似Agilent的是 TeflonAF管的材質(比金子都貴的材料呀),也有用石英光纖的。Waters的流通池貌似改過幾版,老一些UPLC上的是掛在外面的粗棒子,新的放在機箱內了。
    在流動相必須用緩沖鹽的情況下,部分實驗人員更愿意用HPLC。因為用UPLC的時候,對流動相和樣品的前處理要求明顯要高很多,不然極易堵柱和系統。對于大多數使用者來說,應該都是希望購買的不是最貴的,而是最合適的儀器。
(內容來源液相色譜之家)


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